小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：
96T
1.2ng/ml - 45ng/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量。
小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)
1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入  1,4,5-
三磷酸肌醇(IP3)，再與 HRP標(biāo)記的1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體 ，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗用純化的小鼠體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)濃度。
小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒標(biāo)本要
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過(guò)
（HRP）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
40ng/ml
20ng/ml
10ng/ml
5ng/ml
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5ng/ml
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液：將 30倍濃
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜
重復(fù) 5次，拍干。
30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有
析出，稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月